現(xiàn)貨現(xiàn)發(fā)隔天到達
真人真事真本事
咨詢熱線13158823830
咨詢熱線13158823830
伯樂電穿孔儀 165-2661 是一種高精度、高安全性電擊轉化設備，廣泛應用于分子生物學、細胞工程、基因導入、蛋白遞送以及藥物載體研究等實驗領域。
其操作流程涵蓋樣品準備、參數(shù)設定、電擊執(zhí)行、數(shù)據記錄與設備維護等多個階段。
規(guī)范操作不僅能保證實驗成功率，還能延長儀器使用壽命并保障操作安全。
本指南詳細闡述165-2661的標準操作流程、關鍵步驟、注意事項及實驗優(yōu)化方法，為科研人員提供可直接執(zhí)行的標準化參考。
室溫保持在 20–25 ℃，相對濕度 ≤ 70%；
臺面應平整、干燥、防靜電；
周圍避免放置高頻電磁設備；
保證良好通風，防止高壓放電產生臭氧積聚；
照明充足，便于觀察樣品狀態(tài)。
開機前依次完成以下檢查：
檢查電源線連接牢固，接地線無損；
電源規(guī)格：AC 220 V ±10%，50/60 Hz；
觀察 ShockPod 電擊槽干燥、清潔、無鹽漬；
電擊杯無裂痕、無殘留液體；
控制面板按鍵靈敏、顯示正常；
風扇運轉平穩(wěn)、通風口無堵塞；
接通電源后系統(tǒng)自動自檢，顯示 SELF TEST PASSED；
若出現(xiàn) FAULT 或報警聲，立即停止操作并檢查模塊。
取對數(shù)生長期細胞，保證細胞活性高；
采用去離子水或低離子緩沖液（如無鹽HEPES緩沖液）洗滌三次；
最后以低導電緩沖液重懸，電導率控制在 0.5–1.5 mS/cm；
細胞濃度參考：
E. coli：約 1×10? cells/mL
酵母：約 1×10? cells/mL
哺乳動物細胞：約 10?–10? cells/mL
DNA應高純度、無蛋白或鹽分污染；
體積一般為 1–5 μL；
建議預冷至 4 ℃ 備用。
細胞懸液與電擊杯一并置于冰上 10 分鐘；
有助于減少熱損傷，提高細胞存活率。
打開電源開關，儀器自動檢測高壓模塊、電容、電阻與溫控系統(tǒng)；
顯示屏出現(xiàn)主菜單，默認顯示上次使用參數(shù)；
READY 指示燈亮起，表示系統(tǒng)處于待機狀態(tài)；
若出現(xiàn)異常信息（如過溫、蓋鎖未閉合），根據提示排查后重新啟動。
按 “MENU” 鍵進入參數(shù)設置界面，可選擇：
Manual Setup：手動設定實驗參數(shù)；
Preset Protocol：調用已保存方案。
| 參數(shù)項 | 范圍 / 單位 | 推薦值（典型） | 功能說明 |
|---|---|---|---|
| Voltage 電壓 | 10–3500 V | 細菌 2000 V；哺乳動物 600 V | 決定電場強度 |
| Capacitance 電容 | 25–3275 μF | 細菌 25 μF；酵母 500 μF；哺乳動物 800 μF | 控制能量釋放速率 |
| Resistance 電阻 | 50–600 Ω（自動） | 默認 Auto | 控制放電時間常數(shù) |
| Pulse Type 波形 | Exponential / Square | Exponential | 依據細胞類型選擇 |
| Pulse Count 次數(shù) | 1–10 | 一般 1；哺乳動物可 2–3 | 控制電擊次數(shù) |
| Interval 間隔 | 0.5–2 s | 默認 1 s | 多次脈沖間休息時間 |
設置完成后按 “SAVE” 保存方案，以便重復實驗調用。
選用匹配電擊杯：
0.1 cm 間距：高電壓、小體積；
0.2 cm 間距：常用通用型；
0.4 cm 間距：適合動物細胞。
將樣品液體吸入電擊杯，體積為推薦容量的 70–80%；
檢查是否有氣泡，如有可輕拍去除；
用無絨紙擦拭外壁殘液，防止短路；
將電擊杯放入 ShockPod 槽內；
輕壓蓋子直至“咔噠”聲，系統(tǒng)檢測蓋鎖閉合并顯示 “LID CLOSED”。
按下 “PULSE” 鍵開始充電；
屏幕提示 “CHARGING …”；
當電壓達到設定值，顯示 “READY TO PULSE”。
按 “ENTER” 鍵觸發(fā)電擊；
屏幕實時顯示放電電壓、電流及時間常數(shù) τ；
放電持續(xù)數(shù)毫秒后自動結束；
狀態(tài)顯示 “COMPLETE”；
系統(tǒng)自動進行放電能量釋放與冷卻（約 10 秒）。
READY 燈重新亮起，表示放電完成；
可安全打開蓋子并取出電擊杯。
待 10 秒確認無殘余電壓后取出電擊杯；
立即將樣品加入恢復培養(yǎng)基中；
輕輕混勻避免劇烈振蕩；
按下表進行培養(yǎng)恢復：
| 樣品類型 | 培養(yǎng)基 | 溫度 / 時間 |
|---|---|---|
| E. coli | SOC 培養(yǎng)基 | 37 ℃，45 分鐘 |
| 酵母 | YPD 培養(yǎng)基 | 30 ℃，1 小時 |
| 動物細胞 | 完全培養(yǎng)基 | 37 ℃，5% CO?，2 小時 |
| 植物原生質體 | 甘露醇緩沖液 | 25 ℃，1 小時 |
每次放電后，系統(tǒng)自動記錄：
實際電壓、電容、電阻；
時間常數(shù) τ；
能量釋放率（%）；
放電次數(shù)與波形類型；
模塊溫度與日期。
插入 USB 存儲設備；
菜單選擇 “Data → Export”；
系統(tǒng)生成 .csv 文件；
文件名含實驗日期與編號，可在 Excel 中查看。
比較設定與實測電壓偏差（應 ≤2%）；
計算時間常數(shù) τ 是否符合目標范圍（4–8 ms 為最佳）；
檢查能量釋放是否正常（≥90%）；
異常數(shù)據應記錄備注原因。
操作前確認蓋鎖閉合；
放電過程中嚴禁觸碰 ShockPod；
樣品不得含鹽或導電雜質；
放電后等待 10 秒再取樣；
嚴禁連續(xù)多次放電，間隔 ≥10 秒；
儀器周圍保持干燥無液體；
遇異常（如閃光、異味、噪音）立即斷電；
不得在開啟蓋子的狀態(tài)下充電或放電；
維修或校準必須由專業(yè)人員進行。
關閉電源，等待系統(tǒng)放電完成；
拔掉電源線；
用無水乙醇擦拭 ShockPod 內部及電擊杯表面；
干燥后放置在無塵環(huán)境中。
| 項目 | 頻率 | 內容 |
|---|---|---|
| 電源系統(tǒng) | 每 3 個月 | 檢查穩(wěn)壓與接地情況 |
| 電容模塊 | 每 6 個月 | 校準容量值 |
| ShockPod | 每月 | 清潔觸點、防腐蝕 |
| 風扇與過濾網 | 每季度 | 清理灰塵 |
| 接地電阻 | 每年 | ≤ 1 Ω |
| 系統(tǒng)校準 | 每年 | 完整電壓、電容檢測 |
環(huán)境溫度 10–35 ℃；
相對濕度 ≤ 70%；
遠離陽光直射與腐蝕性氣體；
ShockPod 與電擊杯單獨密封保存。
| 問題 | 可能原因 | 解決措施 |
|---|---|---|
| 無法放電 | 蓋鎖未閉合 / ShockPod 接觸不良 | 重新鎖蓋或清潔觸點 |
| 放電電弧 | 樣品含鹽 / 有氣泡 | 重新制備樣品并排氣泡 |
| 電壓偏低 | 電源不穩(wěn) / 電容老化 | 檢查電源或更換模塊 |
| 時間常數(shù)偏差大 | 電阻匹配異常 | 啟用自動匹配模式 |
| 無顯示或黑屏 | 控制電路松動 | 關閉電源檢查連接線 |
| 異常噪聲 | 風扇積塵 / 散熱不良 | 清理通風口 |
標準八步法：
設備檢查
檢查電源、接地、ShockPod、電擊杯狀態(tài)。
樣品準備
去鹽、預冷、濃度調整、排氣泡。
參數(shù)設定
設置電壓、電容、波形等實驗參數(shù)。
樣品裝載
加入樣品、放入 ShockPod、鎖定蓋。
放電執(zhí)行
按“PULSE”充電、“ENTER”放電。
樣品回收
放電后 10 秒取樣，轉入培養(yǎng)液。
數(shù)據記錄
自動保存并導出實驗參數(shù)。
清理維護
關閉電源、擦拭清潔、檢查狀態(tài)。
電場均勻性
樣品應充滿電極間隙但不溢出。
溫度控制
預冷樣品可降低電擊熱損傷。
氣泡控制
排氣泡以防電弧導致樣品死亡。
間隔放電
連續(xù)實驗需間隔 ≥10 秒。
數(shù)據分析
每次實驗記錄 τ 值與能量，判斷系統(tǒng)穩(wěn)定性。
多體系優(yōu)化
建議針對不同細胞類型單獨建立參數(shù)數(shù)據庫。
示例 1：大腸桿菌電轉化
電擊杯間距：0.2 cm
電壓：2000 V
電容：25 μF
電阻：200 Ω
時間常數(shù)：約 4.8 ms
成功率：約 90–95%
示例 2：CHO 細胞轉染
電擊杯間距：0.4 cm
電壓：650 V
電容：800 μF
波形：方波，2 次脈沖
成功率：約 80–85%，細胞存活率高。
實驗結束后應完成以下記錄：
樣品編號、體系類型；
電壓、電容、時間常數(shù)；
能量釋放率、放電次數(shù)；
細胞狀態(tài)、陽性率或轉化效率；
操作人員、日期與備注。
報告應保存電子版與紙質版，便于溯源。
杭州實了個驗生物科技有限公司
